本發(fā)明涉及藥物分析領(lǐng)域，具體涉及一種艾曲泊帕乙醇胺原料藥中重氮鹽雜質(zhì)的分析方法。

背景技術(shù)：

1、艾曲泊帕乙醇胺是諾華開發(fā)的一款非肽類血小板生成素受體(tpo-r)激動劑。該藥用于治療既往對糖皮質(zhì)激素、免疫球蛋白等治療反應(yīng)不佳的慢性免疫性(特發(fā)性)血小板減少癥(itp)，成為全球首個針對該適應(yīng)癥的口服藥物。

2、艾曲泊帕乙醇胺在制備過程中其起始物料硝基在三氯化鐵和水合肼作用下形成重氮鹽雜質(zhì)，后經(jīng)水解生成中間體1，中間體1與中間體2反應(yīng)生產(chǎn)艾曲泊帕，故艾曲泊帕中有殘留重氮鹽雜質(zhì)的可能性。

3、

4、重氮鹽雜質(zhì)含有警示結(jié)構(gòu)，根據(jù)ich?m7指導(dǎo)原則對基因毒性雜質(zhì)限度要求，重氮鹽雜質(zhì)可采用ttc(每日攝入1.5μg)計算，艾曲泊帕最大日劑量為75mg，折算成艾曲泊帕乙醇胺為95.7mg，故本品中重氮鹽雜質(zhì)限度為15.7ppm，限度較低，對分析方法靈敏度和供試品的溶解能力要求均較高。

5、杜允等人的《二氯聯(lián)苯二胺重氮鹽濃度的定量檢測方法》和劉波靜等人的《苯胺類重氮鹽檢測方法的研究》，均公開了采用分光光度法測定重氮鹽的方法，該方法通過重氮鹽偶合顯色，再通過紫外吸光度間接定量。然而，該方法靈敏度不足，同時偶合反應(yīng)可能不完全，顯色產(chǎn)物穩(wěn)定性受ph影響顯著，會導(dǎo)致結(jié)果準(zhǔn)確性降低。

6、專利cn118533993a公開了艾曲泊帕乙醇胺有關(guān)物質(zhì)的hplc-uv檢測方法，該專利檢測的物質(zhì)均為非重氮化合物，同時檢測方法采用uv檢測，易受基質(zhì)干擾，導(dǎo)致靈敏度不足，并且無法區(qū)分結(jié)構(gòu)相似的雜質(zhì)，缺乏特異性。

7、重氮鹽雜質(zhì)在堿性條件下不穩(wěn)定，所以供試品溶液必須是酸性條件，但是艾曲泊帕乙醇胺在堿性條件溶解性較好，在酸性條件下溶解性較差。由此需要開發(fā)一種針對艾曲泊帕乙醇胺原料藥中重氮鹽雜質(zhì)的直接分析方法，使艾曲泊帕能夠滿足檢測靈敏度的情況下能夠溶解，且制備的供試品溶液的酸性能夠保證重氮鹽雜質(zhì)是穩(wěn)定的。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述不足之處，本發(fā)明提供了一種艾曲泊帕乙醇胺原料藥中重氮鹽雜質(zhì)的分析方法，用以解決現(xiàn)有檢測方法靈敏度低，間接測量導(dǎo)致準(zhǔn)確度降低的問題，并在艾曲泊帕乙醇胺能夠溶解的情況下保證重氮鹽雜質(zhì)的穩(wěn)定性。

2、為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種艾曲泊帕乙醇胺原料藥中重氮鹽雜質(zhì)的分析方法，具體采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法：

4、對照品儲備液：取重氮鹽雜質(zhì)對照品，用溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中含重氮鹽雜質(zhì)750ng的溶液，作為對照品儲備液；

5、對照品溶液：量取對照品儲備液與50％乙腈置于量瓶中，用溶劑定量稀釋成每1ml中含重氮鹽雜質(zhì)75ng的溶液，作為對照品溶液；

6、供試品溶液：稱取艾曲泊帕乙醇胺適量，加入50％乙腈，用溶劑定量稀釋制成每1ml中約含艾曲泊帕乙醇胺5mg的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液；

7、取供試品溶液和對照品溶液分別進(jìn)樣檢測；

8、所述重氮鹽雜質(zhì)結(jié)構(gòu)如下：

9、

10、進(jìn)一步地，所述溶劑為0.1％甲酸-乙腈(1:1)。

11、進(jìn)一步地，所述色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.2％甲酸溶液為流動相a，以0.2％甲酸乙腈溶液為流動相b進(jìn)行梯度洗脫。

12、進(jìn)一步地，色譜柱柱溫為30℃，流速為0.6ml/min，進(jìn)樣體積15μl。

13、進(jìn)一步地，洗脫程序為：

14、

15、進(jìn)一步地，質(zhì)譜條件為：以esi為離子源，監(jiān)測模式為多反應(yīng)監(jiān)測，正離子掃描，以m/z?241→213為定性離子對，以m/z?241→195為定量離子對；去溶液溫度為550℃，毛細(xì)管電壓為2.0kv，質(zhì)譜采集時間為0～4.3min。

16、進(jìn)一步地，所述重氮鹽雜質(zhì)的檢測限濃度不高于2.242ng/ml。

17、進(jìn)一步地，所述重氮鹽雜質(zhì)的檢測限濃度不高于7.475ng/ml。

18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有下述有益技術(shù)效果：

19、(1)首創(chuàng)性：首次實現(xiàn)艾曲泊帕乙醇胺中重氮鹽雜質(zhì)的直接、高靈敏度的lc-ms/ms檢測，填補該重氮鹽雜質(zhì)檢測方法的空白。

20、(2)超高靈敏度：檢測限低至2.242ng/ml(0.0448ppm)，定量限7.475ng/ml(0.1495ppm)，滿足ich?m7對基因毒性雜質(zhì)15.7ppm的嚴(yán)格限度要求。

21、(3)溶解性-穩(wěn)定性平衡：選擇0.1％甲酸-乙腈(1:1)作為溶劑，在溶解艾曲泊帕乙醇胺的同時還能保證其中重氮鹽雜質(zhì)的穩(wěn)定性。

22、(4)方法穩(wěn)健性：本發(fā)明的分析方法專屬性強(無基質(zhì)干擾)，準(zhǔn)確度良好，平均回收率在89.61％～100.81％之間，線性關(guān)系良好(r2＝0.9997)，精密度高(rsd≤15％)，為原料藥質(zhì)量控制提供可靠保障。

1.一種艾曲泊帕乙醇胺原料藥中重氮鹽雜質(zhì)的分析方法，其特征在于，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述溶劑為0.1％甲酸-乙腈(1:1)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述色譜條件為：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以0.2％甲酸溶液為流動相a，以0.2％甲酸乙腈溶液為流動相b進(jìn)行梯度洗脫。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分析方法，其特征在于，所述色譜柱柱溫為30℃，流速為0.6ml/min，進(jìn)樣體積15μl。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的分析方法，其特征在于，所述梯度洗脫程序為：

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，質(zhì)譜條件為：以esi為離子源，監(jiān)測模式為多反應(yīng)監(jiān)測，正離子掃描，以m/z?241→213為定性離子對，以m/z?241→195為定量離子對；去溶液溫度為550℃，毛細(xì)管電壓為2.0kv，質(zhì)譜采集時間為0～4.3min。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述重氮鹽雜質(zhì)的檢測限濃度不高于2.242ng/ml。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述重氮鹽雜質(zhì)的檢測限濃度不高于7.475ng/ml。