技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及獸用抗生素制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抑制豬藍(lán)耳病病毒復(fù)制的獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑及其制備方法。

背景技術(shù)：

酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素又稱泰萬(wàn)菌素、超級(jí)泰樂(lè)菌素，為新一代超級(jí)大環(huán)內(nèi)酯類中新型動(dòng)物專用抗生素。酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素是目前殺滅支原體活性最強(qiáng)的抗生素，酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素及其代謝產(chǎn)物（3-AT）不但對(duì)肺炎支原體等病原體具有很強(qiáng)的殺滅活性，同時(shí)還可激活機(jī)體巨噬細(xì)胞，使巨噬細(xì)胞數(shù)量增加，吞噬功能增強(qiáng)，同時(shí)促進(jìn)溶菌酶的分泌，增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能，改善藍(lán)耳病病毒的免疫抑制性因素的影響，間接地抑制藍(lán)耳病毒在機(jī)體定植。

酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素生物活性穩(wěn)定、生物利用度極高，不易產(chǎn)生耐藥性，與其他常用抗菌藥物無(wú)交叉耐藥性，廣譜高效、敏感性高，是大環(huán)內(nèi)酯類中作用最強(qiáng)的抗菌藥物。目前酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑主要通過(guò)拌料飼喂給藥，但酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥氣味較大，味苦，且易飛散，使其適口性差，影響動(dòng)物采食，需增加給藥次數(shù)，不利于達(dá)到高效的治療效果。因此目前研發(fā)企業(yè)急需完善該預(yù)混劑的制備工藝，掩蓋其苦味，改善動(dòng)物的適口性，提高利用率，保證其臨床療效以達(dá)到治療的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供了一種獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，該預(yù)混劑中含有酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物，該包合物可有效防止光照、溫度的影響，從而提高藥物的穩(wěn)定性，避免藥物受飼料中成分的影響，掩蓋藥物的苦味，增加畜禽的適口性，且具有較好的流動(dòng)性，易于混飼給藥，另外酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物可以延緩藥物釋放，延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間，從而起到長(zhǎng)效、緩釋作用。

本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供了一種上述獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑的制備方法。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的的技術(shù)方案是：

一種獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，由酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物和基質(zhì)稀釋劑組成。

優(yōu)選地，所述酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物中的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素在預(yù)混劑中的重量百分比為20%。

所述的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物的制備方法如下：

（1）、將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥與包被載體按1:1-1:4的重量比攪拌30min混勻，制成藥物-包被載體混合物；

所述的包被載體為羥丙基-β-環(huán)糊精、聚丙烯酸樹(shù)酯Ⅱ和聚乙二醇6000中的任意一種或兩種以上的混合物；

優(yōu)選地，所述的包被載體為聚丙烯酸樹(shù)酯Ⅱ，或包被載體為羥丙基-β-環(huán)糊精與聚乙二醇6000重量比2：1-4：1的混合物；

最佳地，所述的包被載體為羥丙基-β-環(huán)糊精與聚乙二醇6000重量比為2：1-4：1的混合物；

（2）、將羧甲基纖維素、D-山梨醇和無(wú)水乙醇加入到上述混合物中，繼續(xù)攪拌混勻，得到半包合的藥物；

所述的羧甲基纖維素的用量為步驟（1）的藥物-包被載體混合物重量的0.5%-2%，D-山梨醇的用量為步驟（1）的藥物-包被載體混合物重量的1%-5%，所述的無(wú)水乙醇的用量為步驟（1）的藥物-包被載體混合物重量的2%-8%；

（3）、將液態(tài)聚乙二醇在攪拌下滴加到上述半包合的藥物中以提高包封率，滴完后以800r/min的速度攪拌1.5h，所得包合物水洗，然后真空干燥，至無(wú)水乙醇揮發(fā)完全，得到粉末狀的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物；

所述的液態(tài)聚乙二醇為聚乙二醇200或聚乙二醇400，優(yōu)選聚乙二醇200；

所述的液態(tài)聚乙二醇用量為步驟（1）的藥物-包被載體混合物重量的0.5%-1.5%。

所述的基質(zhì)稀釋劑為淀粉和/或滑石粉。

最佳地，所述的基質(zhì)稀釋劑為滑石粉。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第二個(gè)目的的技術(shù)方案是：

一種上述獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑的制備方法，步驟如下：

首先測(cè)定酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物的包封率和載藥量，然后通過(guò)該載藥量和所需的獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑中的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素含量來(lái)計(jì)算需要加入的基質(zhì)稀釋劑的量，然后將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物和基質(zhì)稀釋劑置于攪拌混合器中，攪拌15min后即制得。

優(yōu)選地，所述酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物中的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素在預(yù)混劑中的重量百分比為20%。

載藥量和包封率分別按以下公式計(jì)算：

包合物載藥量=包合物內(nèi)的藥量/包合物的總重量×100%

包合物包封率=[包合物內(nèi)的藥量/（包合物內(nèi)的藥量+介質(zhì)中的藥量）]×100%

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果在于：

在本發(fā)明中添加了無(wú)水乙醇和聚乙二醇200或聚乙二醇400促進(jìn)包合物的粘合，同時(shí)加入潤(rùn)濕劑D-山梨醇及粘合劑羧甲基纖維素，形成半固體狀態(tài)，增加了整個(gè)藥物與高分子載體之間的分子作用力，提高了包合物的包封率。

本發(fā)明制得的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物，重復(fù)性好，包封率可達(dá)到87.6%，所制備的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑性質(zhì)穩(wěn)定，均一性好，流動(dòng)性大，無(wú)苦味，適口性得到了大大的改善。具備掩蓋藥物的苦味、增加藥物溶出速度、提高藥物穩(wěn)定性以及生物利用度等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)胃腸道刺激性小，且具有吸收不受胃排空的影響，吸收均勻，能改變釋藥速率等優(yōu)點(diǎn)。

附圖說(shuō)明

圖1為A組豬免疫前藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

圖2為B組豬免疫前藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

圖3為A組免疫后藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

圖4為B組免疫后藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面申請(qǐng)人將結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，目的在于使本領(lǐng)域技術(shù)人員更加清楚完整地理解本發(fā)明。以下內(nèi)容不應(yīng)以任何方式被理解或解釋為對(duì)本技術(shù)權(quán)利要求書(shū)請(qǐng)求保護(hù)范圍的限制。

實(shí)施例1

一種獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，其制備方法如下：

（1）將10g酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥與10g聚丙烯酸樹(shù)脂Ⅱ進(jìn)行攪拌混勻，時(shí)間為30min，制成藥物-包被載體混合物；

（2）將0.1g羧甲基纖維素、0.2gD-山梨醇和0.4ml無(wú)水乙醇加入到步驟（1）所得藥物-包被載體混合物中，繼續(xù)攪拌混勻，得到半包合的藥物；

（3）將0.05ml聚乙二醇200在攪拌下滴加到步驟（2）的半包合的藥物中，以提高包封率，滴完后以800r/min的速度攪拌1.5h，所得包合物水洗，然后真空干燥，至無(wú)水乙醇揮發(fā)完全，得到粉末狀酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物，測(cè)得包封率為78.5%，載藥量為25.8%；

（4）根據(jù)載藥量，加入淀粉到步驟（3）所得酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物中，一同置于攪拌混合器中，攪拌15min將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物稀釋至酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素重量百分比為20%的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，所得預(yù)混劑均一性較好，流動(dòng)性一般。

實(shí)施例2

一種獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，其制備方法如下：

（1）將10g酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥與20g包被載體復(fù)合物（包被載體復(fù)合物為羥丙基-β-環(huán)糊精與聚乙二醇6000重量比2:1的混合物）進(jìn)行攪拌混勻，時(shí)間為30min，制成藥物-包被載體混合物；

（2）將0.3g羧甲基纖維素、0.3gD-山梨醇和1.2ml無(wú)水乙醇加入到步驟（1）所得藥物-包被載體混合物中，繼續(xù)攪拌混勻，得到半包合的藥物；

（3）將0.075ml聚乙二醇200在攪拌下滴加到步驟（2）的半包合的藥物中，以提高包封率，滴完后以800r/min的速度攪拌1.5h，所得包合物水洗，然后真空干燥，至無(wú)水乙醇揮發(fā)完全，得到粉末狀酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物，測(cè)得包封率為81.5%，載藥量為33.4%；

（4）根據(jù)載藥量，加入滑石粉到步驟（3）所得酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物中，一同置于攪拌混合器中，攪拌15min將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物稀釋至酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素重量百分比為20%的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，所得預(yù)混劑均一性較好，流動(dòng)性較好。

實(shí)施例3

一種獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，其制備方法如下：

（1）將10g酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥與30g包被載體復(fù)合物（包被載體復(fù)合物為羥丙基-β-環(huán)糊精與聚乙二醇6000重量比3:1的混合物）進(jìn)行攪拌混勻，時(shí)間為30min，制成藥物-包被載體混合物；

（2）將羧甲基纖維素0.6g、1.6gD-山梨醇和2.0ml無(wú)水乙醇加入到步驟（1）所得藥物-包被載體混合物中，繼續(xù)攪拌混勻，得到半包合的藥物；

（3）將0.2ml聚乙二醇200在攪拌下滴加到步驟（2）的半包合的藥物中，以提高包封率，滴完后以800r/min的速度攪拌1.5h，所得包合物水洗，然后真空干燥，至無(wú)水乙醇揮發(fā)完全，得到粉末狀酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物，測(cè)得包封率為87.6%，載藥量為36.8%；

（4）根據(jù)載藥量，加入滑石粉到步驟（3）所得酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物中，一同置于攪拌混合器中，攪拌15min將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物稀釋至酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素重量百分比為20%的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，所得預(yù)混劑均一性好，流動(dòng)性好。

實(shí)施例4

一種獸用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，其制備方法如下：

（1）將10g酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥與40g包被載體復(fù)合物（包被載體復(fù)合物為羥丙基-β-環(huán)糊精與聚乙二醇6000重量比4:1的混合物）進(jìn)行攪拌混勻，時(shí)間為30min，制成藥物-包被載體混合物；

（2）將1g羧甲基纖維素、2.5gD-山梨醇和4.0ml無(wú)水乙醇加入到步驟（1）所得藥物-包被載體混合物中，繼續(xù)攪拌混勻，得到半包合的藥物；

（3）將0.375ml聚乙二醇200在攪拌下滴加到步驟（2）的半包合的藥物中，以提高包封率，滴完后以800r/min的速度攪拌1.5h，所得包合物水洗，然后真空干燥，至無(wú)水乙醇揮發(fā)完全，得到粉末狀酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物，測(cè)得包封率為80.3%，載藥量為25.6%；

（4）根據(jù)載藥量，加入滑石粉到步驟（3）所得酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物中，一同置于攪拌混合器中，攪拌15min將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素包合物稀釋至酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素重量百分比為20%的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，所得預(yù)混劑均一性較好，流動(dòng)性一般。

本發(fā)明的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑穩(wěn)定性試驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)材料

⒈試劑和藥品

酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑（由實(shí)施例3制得），酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥+載體（對(duì)照組）。

⒉主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備

藥品穩(wěn)定性試驗(yàn)箱無(wú)錫晟澤理化器械有限公司生產(chǎn)。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.試驗(yàn)組

按照實(shí)施例3方法制備20wt%酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑三批分別為20120903、20120904、20120905。

2.對(duì)照組

直接將酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素原料藥與載體滑石粉混合均勻，配置20%（重量百分比）的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，批號(hào)分別為：20120906、20120907、20120908。

3.試驗(yàn)方法及結(jié)果

將六批樣品放置在溫度為40±2℃，相對(duì)濕度為75±5%的條件下進(jìn)行加速試驗(yàn)。采用亞硝酸鈉飽和溶液為加濕劑，將六批樣品置于穩(wěn)定性試驗(yàn)箱中，調(diào)溫至40±2℃，定期觀察3個(gè)月，于第0、1、3個(gè)月各取樣一次，并評(píng)價(jià)其含量、性狀、適口性和流動(dòng)性結(jié)果見(jiàn)表3-2。

表3-2加速試驗(yàn)（40±2℃，RH75±5%）

結(jié)果表明：由實(shí)施例3制得的三批酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑在加速試驗(yàn)中性質(zhì)穩(wěn)定，含量未發(fā)生明顯的變化，而未經(jīng)包被的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素直接與載體混合后制備的預(yù)混劑，性質(zhì)不穩(wěn)定，苦味未得到掩蓋，適口性差，含量有明顯下降，加速試驗(yàn)含量下降均超過(guò)5%，發(fā)生了明顯的變化。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可說(shuō)明通過(guò)包合后，酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素的穩(wěn)定性得到了大大提高，且所制備的預(yù)混劑流動(dòng)性好，性質(zhì)穩(wěn)定，無(wú)苦味，適口性得到改善。

本發(fā)明的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑對(duì)母豬藍(lán)耳病穩(wěn)定的臨床試驗(yàn)

1試驗(yàn)?zāi)康?/p>

本實(shí)驗(yàn)旨在評(píng)價(jià)酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑對(duì)母豬藍(lán)耳病的穩(wěn)定性試驗(yàn)研究，觀察臨床上母豬使用酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑后藍(lán)耳病的抑制情況。

2供試藥品

酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑，含量規(guī)格20%，按實(shí)施例3制備而得。

3試驗(yàn)動(dòng)物

健康后備母豬(無(wú)接種藍(lán)耳疫苗)，60頭。試驗(yàn)前預(yù)飼3d，飼喂不含大環(huán)內(nèi)酯類藥物的飼料，自由飲水。

4試驗(yàn)設(shè)計(jì)

（1）給藥：設(shè)置每1t飼料添加400g酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑劑量組，連續(xù)給藥2周。

（2）試驗(yàn)分組：將60頭健康后備母豬（無(wú)接種藍(lán)耳疫苗）隨機(jī)分成兩組，各30頭。

實(shí)驗(yàn)組：飼喂按后備母豬營(yíng)養(yǎng)要求配制并添加酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑的日糧。再接種藍(lán)耳疫苗。

空白對(duì)照組：飼喂按后備母豬營(yíng)養(yǎng)要求配制并不添加任何藥物的日糧。再接種藍(lán)耳疫苗。

（1）臨床癥狀見(jiàn)表1。

表1臨床癥狀情況

從以上結(jié)果，可以看出，試驗(yàn)組與對(duì)照組，體溫上無(wú)明顯差異，均在正常體溫范圍內(nèi)，但精神狀態(tài)對(duì)照組較試驗(yàn)組差，以及對(duì)照組出現(xiàn)18頭呼吸加快的反應(yīng)，并且對(duì)照組平均采食量有下降的趨勢(shì)，總結(jié)得出給藥組對(duì)母豬抗病力有所提高，并且能提高采食量。

（2）抗體水平檢測(cè)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)組設(shè)為組A，空白對(duì)照組設(shè)為組B，各30頭，分別編號(hào)為A1-A30，B1-B30。

表2免疫前各組豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

附圖1為A組豬免疫前藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果，附圖2為B組豬免疫前藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

表3免疫后各組藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果

圖3為A組免疫后藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果，圖4為B組免疫后藍(lán)耳病抗體檢測(cè)結(jié)果。

注：豬繁殖與呼吸綜合征(豬藍(lán)耳病)病毒抗體檢測(cè)ELISA試劑盒，武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司，批號(hào)：120505。判斷標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)成立的條件是陽(yáng)性對(duì)照平均值OD630nm值≥0.7，陰性對(duì)照平均OD630nm值＜0.3。樣品OD630nm值＞0.42，判為陽(yáng)性（＋）；樣品OD630nm值＜0.38判為陰性（－）；樣品OD630nm值介于0.38和0.42之間，判為可疑（±），需重新檢測(cè)。

免疫前隨機(jī)分配為2組的后備母豬，都存在藍(lán)耳病的感染。經(jīng)過(guò)酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑處理組再免疫藍(lán)耳病疫苗后藍(lán)耳病抗體都比較高，抗體水平整齊。對(duì)照組免疫藍(lán)耳病抗體后抗體雖有所增加，但抗體水平極不整齊，抗體差別比較大，而且部分豬經(jīng)藍(lán)耳病疫苗免疫但抗體依然不高，這樣的豬群并不能抵御藍(lán)耳病的感染，存在爆發(fā)藍(lán)耳病的危險(xiǎn)，豬群極不穩(wěn)定。通過(guò)豬群的抗體水平我們可以看出實(shí)施例3制得的酒石酸乙酰異戊酰泰樂(lè)菌素預(yù)混劑對(duì)藍(lán)耳病病毒的抑制具有很明顯的效果。