技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種天然藥物組合物，更具體地涉及一種由艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖組成的天然藥物組合物，該天然藥物組合物的制備方法以及該天然藥物組合物在用于制備減少癌癥化療相關(guān)性腹瀉并對(duì)癌癥治療起增效作用的藥物中的用途。

背景技術(shù)：

惡性腫瘤是當(dāng)前危害人類(lèi)生存，健康的主要疾病之一，其治療手段包括手術(shù)、化療、放療、中醫(yī)藥治療，而化療治療腫瘤的效果尤為突出?；熕師o(wú)論單用或聯(lián)合用均會(huì)引起患者腹瀉等毒副反應(yīng)，腫瘤化療后腹瀉又叫化療相關(guān)性腹瀉。近年來(lái)隨著化療藥物如5-氟尿嘧啶、紫杉烷類(lèi)、羥基喜樹(shù)堿、伊立替康、希羅達(dá)等的面世及推廣應(yīng)用，化療相關(guān)性腹瀉的發(fā)生率逐年提高，而且若不進(jìn)行積極治療，易導(dǎo)致患者脫水、營(yíng)養(yǎng)不良、血清電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡失調(diào)等，不僅對(duì)機(jī)體的康復(fù)帶來(lái)極大的不利，也給周期性化療帶來(lái)一定的困難，因此對(duì)化療相關(guān)性腹瀉的有效治療已成為腫瘤患者整體治療的重要組成部分。

化療相關(guān)性腹瀉就其臨床表現(xiàn)來(lái)看，當(dāng)屬中醫(yī)學(xué)“泄瀉”范疇，中醫(yī)藥對(duì)于泄瀉的研究，令人矚目，但是目前尚無(wú)對(duì)抗癌癥化療具有減輕腹瀉及增效作用的中成藥。因此，研發(fā)一種高效低毒、價(jià)格低廉，易于推廣的可用于減輕癌癥化療相關(guān)性腹瀉并起化療增效作用的天然中藥成為臨床亟待解決的問(wèn)題。

艾葉是菊科蒿屬植物ArtemisiaeargyiLed．etVant．的葉，具有止痛、安胎、止痢、開(kāi)郁等功效。山藥為多年生纏繞草本，中藥、蔬菜兼用，對(duì)脾虛泄瀉有治療作用。近年來(lái)，艾葉和山藥抗癌作用得到證實(shí)，本發(fā)明人經(jīng)過(guò)大量的各配方比例的研究和實(shí)驗(yàn)，最后獲得了本發(fā)明的最佳藥物比例組合物，并證明了其對(duì)癌癥化療相關(guān)性腹瀉有極好的療效并能同時(shí)對(duì)化療增效，由此完成了本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供的一種天然藥物組合物，由艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖以重量計(jì)按2-4:3-8:5-7:4-6的比例組成。

上述天然藥物組合物，其中艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖的用量比例是4:8:7:6。

其中，艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的常規(guī)方法進(jìn)行提純獲得，采用常規(guī)方法獲得的這些成分或采用商業(yè)購(gòu)得的成分組成的本發(fā)明的天然藥物均能獲得相同的療效。

優(yōu)選地，上述天然藥物組合物中艾葉山藥水煎濃縮提取物的制備方法是：

按照配伍比例為1-5∶1取艾葉、山藥，蒸餾水浸泡，加熱煎煮，絹布過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水，同法浸泡、煎煮、過(guò)濾，將兩次濾液混合，加熱濃縮，超濾膜過(guò)濾，70℃減壓干燥即得。

上述天然藥物組合物中艾葉乙酸乙酯提取物的制備方法是：

艾葉適量，95％乙醇提取，回收溶劑得醇提浸膏，浸膏用正己烷提取后、再用乙酸乙酯提取，將得到的乙酸乙酯提取物回收溶劑即得。

上述天然藥物組合物中山藥乙醇提取物制備方法是：

取山藥粉末，95％乙醇回流提取3次，去掉上清液，濾渣用蒸餾水在45℃提取4次，收集提取液，離心，收集上清液，將上清液濃縮，加入乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心，收集沉淀，分別用乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀，冷凍干燥，即得。

上述天然藥物組合物中山藥多糖制備方法是：

將上述山藥乙醇提取物加水復(fù)溶配成5％溶液，加入Sevag試劑，震蕩，離心，取上清液，加Sevag試劑，如此重復(fù)多次，直至無(wú)白色中間層沉淀，收集上清液濃縮，分別用自來(lái)水和蒸餾水透析，加入乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心，收集沉淀，分別用乙醇、丙酮和乙醚洗滌沉淀，冷凍干燥，即得。

本發(fā)明還提供了該天然藥物組合物的優(yōu)選的制備方法，包括：

（1）艾葉山藥水煎濃縮提取物的制備

按照配伍比例為1-5∶1取艾葉、山藥，蒸餾水浸泡，加熱煎煮，絹布過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水，同法浸泡、煎煮、過(guò)濾，將兩次濾液混合，加熱濃縮，超濾膜過(guò)濾，70℃減壓干燥即得。

（2）艾葉乙酸乙酯提取物的制備

艾葉適量，95％乙醇提取，回收溶劑得醇提浸膏，浸膏用正己烷提取后、再用乙酸乙酯提取，將得到的乙酸乙酯提取物回收溶劑即得。

（3）山藥乙醇提取物制備

取山藥粉末，95％乙醇回流提取3次，去掉上清液，濾渣用蒸餾水在45℃提取4次，收集提取液，離心，收集上清液，將上清液濃縮，加入乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心，收集沉淀，分別用乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀，冷凍干燥，即得。

（4）山藥多糖制備

將上述山藥乙醇提取物加水復(fù)溶配成5％溶液，加入Sevag試劑，震蕩，離心，取上清液，加Sevag試劑，如此重復(fù)多次，直至無(wú)白色中間層沉淀，收集上清液濃縮，分別用自來(lái)水和蒸餾水透析，加入乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心，收集沉淀，分別用乙醇、丙酮和乙醚洗滌沉淀，冷凍干燥，即得。

（5）按比例選取艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖，均勻混合，即得。

上述天然藥物組合物的制備方法，還包括：將步驟（5）制得的產(chǎn)品進(jìn)一步通過(guò)常規(guī)的制藥手段制成含有天然藥物組合物100mg或200mg規(guī)格的膠囊或片劑。

本發(fā)明天然藥物組合物在抗化療相關(guān)性腹瀉及抑制腫瘤方面的有益效果如下：

1、本發(fā)明天然藥物組合物，在伊立替康導(dǎo)致小鼠腹瀉模型的研究表明：對(duì)于伊立替康所致小鼠的腹瀉反應(yīng)有明顯的對(duì)抗作用。

2、證明了本天然藥物組合物能增強(qiáng)化療藥物對(duì)腫瘤的抑制作用，采用了小鼠腫瘤模型，觀察該天然藥物組合物與環(huán)磷酰胺聯(lián)合對(duì)小鼠體內(nèi)腫瘤的抑制作用。研究表明：該天然藥物組合物能明顯增加環(huán)磷酰胺對(duì)于腫瘤的抑制作用。

3、本發(fā)明人獨(dú)創(chuàng)地將艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖進(jìn)行組合，并通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定這些組分之間的用量配比，使該組合物發(fā)揮了協(xié)同作用，經(jīng)過(guò)反復(fù)實(shí)驗(yàn)研究，本發(fā)明的天然藥物組合物各組分的比例在2-4:3-8:5-7:4-6時(shí)產(chǎn)生了出乎意料的協(xié)同作用，增效明顯，對(duì)副作用起到非常好的效果，尤其在各組分的用量比例是4:8:7:6時(shí)尤其明顯，這是本發(fā)明人付出大量創(chuàng)造性勞動(dòng)而獲得的，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員僅僅通過(guò)公開(kāi)的內(nèi)容無(wú)法簡(jiǎn)單獲得這種配比范圍以及最佳用量比例。

4、該天然藥物組合物艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖各組分均可通過(guò)常規(guī)手段獲得，組分如山藥多糖還可通過(guò)商業(yè)購(gòu)得，這樣的組合物本身具有獲得方便、成本較低的效果。這也是發(fā)明人通過(guò)大量創(chuàng)造性勞動(dòng)方獲得的兼具極佳療效和較高工業(yè)實(shí)用性的產(chǎn)品。

具體實(shí)施方式

下面通過(guò)實(shí)施例和試驗(yàn)例進(jìn)一步闡述本發(fā)明天然藥物組合物的制備，以及其在抗腹瀉和抗腫瘤中應(yīng)用的有益效果。

實(shí)施方案

第一步：各種提取物的制備

（1）艾葉山藥水煎濃縮提取物的制備

按照配伍比例為1-5∶1取艾葉、山藥，蒸餾水浸泡，加熱煎煮，絹布過(guò)濾，藥渣再加蒸餾水，同法浸泡、煎煮、過(guò)濾，將兩次濾液混合，加熱濃縮，超濾膜過(guò)濾，70℃減壓干燥即得。

（2）艾葉乙酸乙酯提取物的制備

艾葉適量，95％乙醇提取，回收溶劑得醇提浸膏，浸膏用正己烷提取后、再用乙酸乙酯提取，將得到的乙酸乙酯提取物回收溶劑即得。

（3）山藥乙醇提取物制備

取山藥粉末，95％乙醇回流提取3次，去掉上清液，濾渣用蒸餾水在45℃提取4次，收集提取液，離心，收集上清液，將上清液濃縮，加入乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心，收集沉淀，分別用乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀，冷凍干燥，即得。

（4）山藥多糖制備

將上述山藥乙醇提取物加水復(fù)溶配成5％溶液，加入Sevag試劑，震蕩，離心，取上清液，加Sevag試劑，如此重復(fù)多次，直至無(wú)白色中間層沉淀，收集上清液濃縮，分別用自來(lái)水和蒸餾水透析，加入乙醇，4℃放置過(guò)夜，離心，收集沉淀，分別用乙醇、丙酮和乙醚洗滌沉淀，冷凍干燥，即得。

第二步：制劑的制備

（1）本發(fā)明天然藥物組合物膠囊制劑的制備

分別稱(chēng)取上述步驟制備的艾葉山藥水煎濃縮提取物16mg、艾葉乙酸乙酯提取物32mg、山藥乙醇提取物28mg與山藥多糖24mg，同時(shí)稱(chēng)取淀粉395mg、硬脂酸鎂5mg，均勻混合，填充成膠囊。

（2）本發(fā)明天然藥物組合物片劑的制備

分別稱(chēng)取上述步驟制備的艾葉山藥水煎濃縮提取物16mg、艾葉乙酸乙酯提取物32mg、山藥乙醇提取物28mg與山藥多糖24mg，同時(shí)稱(chēng)取淀粉295mg、乳糖100mg，均勻混合，用濕法制粒、干燥，整粒后與5mg硬脂酸鎂混合，壓成片劑。

藥效及藥理學(xué)資料：

在下述試驗(yàn)例子中組合物為：艾葉山藥水煎濃縮提取物、艾葉乙酸乙酯提取物、山藥乙醇提取物與山藥多糖的用量比例為4:8:7:6。發(fā)明人對(duì)上述各成分用量比例在2-4:3-8:5-7:4-6之間時(shí)的多種配比組合獲得的組合物進(jìn)行了與上相同的實(shí)驗(yàn)，均發(fā)現(xiàn)在這種用量范圍內(nèi)的天然藥物組合物能獲得很好的協(xié)同作用，對(duì)癌癥化療相關(guān)性腹瀉能起到很好的效果并對(duì)癌癥的治療有增效作用。以下是優(yōu)選的實(shí)施方式獲得的藥效學(xué)資料：

試驗(yàn)例1：天然藥物組合物治療化療相關(guān)性腹瀉作用的藥效學(xué)研究

1、試驗(yàn)材料

（1）艾葉，山藥，購(gòu)于藥材市場(chǎng)。

（2）小鼠，體重20±2g，雄性，實(shí)驗(yàn)前自由進(jìn)食飲水。

2、試驗(yàn)方法：

將小鼠隨機(jī)分為5組，每組5只，A組為模型組，B組為艾葉山藥水煎濃縮提取物10g.kg-1(相當(dāng)于含生藥量)，C組為艾葉乙酸乙酯提取物10g.kg-1(相當(dāng)于含生藥量),D組山藥乙醇提取物與山藥多糖按7:6比例混合10g.kg-1(相當(dāng)于含生藥量),E組為本發(fā)明的天然藥物組合物10g.kg-1(相當(dāng)于含生藥量)，伊立替康腹腔注射給藥(75mg/kg)，每天1次，連續(xù)4天，復(fù)制化療相關(guān)性腹瀉模型。B、C、D、E組連續(xù)用相應(yīng)提取物灌胃8天，將小鼠置于代謝籠，籠底鋪白色濾紙以觀察大便情況，并且觀察小鼠肛周情況及鼠尾糞便污染情況，結(jié)合棉簽刺激肛門(mén)排便，每日觀察記錄2次。腹瀉程度標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分如下：0分：大便正?；驔](méi)有；1分：輕度腹瀉，大便可見(jiàn)輕微濕軟；2分：中度腹瀉，大便較濕且不成型。并且有輕度肛周著色；3分，重度腹瀉，水樣便并伴有重度肛周著色。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與模型組比較，本發(fā)明的天然藥物組合物組腹瀉發(fā)生率明顯減輕。結(jié)果見(jiàn)表1.

表1本發(fā)明組合物對(duì)小鼠化療相關(guān)性腹瀉發(fā)生率及評(píng)分影響

注：a相當(dāng)于含生藥量

試驗(yàn)例2：本發(fā)明天然藥物組合物抗腫瘤作用的藥效學(xué)研究

1、實(shí)驗(yàn)材料

（1）昆明種小鼠，體重20±2g，實(shí)驗(yàn)前自由進(jìn)食飲水,24h自然光照射。

（2）環(huán)磷酰胺，江蘇恒瑞醫(yī)藥制藥股份有限公司產(chǎn)品。

2、試驗(yàn)方法：

（1）對(duì)小鼠S180肉瘤生長(zhǎng)的抑制試驗(yàn)

采用傳代5-7天，生長(zhǎng)良好的乳白色腹水，以適量無(wú)菌生理鹽水稀釋成瘤細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為107/mL，每組6只，每鼠右腋窩皮下接種0.2mL（含瘤細(xì)胞2×106個(gè)）。接種次日隨機(jī)分組，實(shí)驗(yàn)組將本發(fā)明的天然藥物組合物分為（200,100mg/mL）兩個(gè)劑量組，每鼠灌胃0.5ml,同時(shí)給予環(huán)磷酰胺10g·kg-1·d-1；陰性對(duì)照組給予0.5mL蒸餾水；陽(yáng)性藥物組給予環(huán)磷酰胺10g·kg-1·d-1,連續(xù)給藥10天。常規(guī)飼養(yǎng)，飲水，食物不限。停藥次日，小鼠全部脫頸椎處死，剝?nèi)∑は聦?shí)體瘤瘤塊，稱(chēng)重，按下列公式計(jì)算腫瘤抑制率（%）：

腫瘤抑制率=〔對(duì)照組平均瘤重（C）-實(shí)驗(yàn)組平均瘤重（T）〕/對(duì)照組平均瘤重（C）

3、試驗(yàn)結(jié)果

本發(fā)明天然藥物組合物低、高劑量組均可增強(qiáng)環(huán)磷酰胺劑與對(duì)S180的抑制程度作用，尤其以高劑量組作用最強(qiáng)。（如表2）

表2本發(fā)明天然藥物組合物對(duì)S180小鼠的腫瘤抑制作用

組別抑制率（%）環(huán)磷酰胺31.5組合物低+環(huán)磷酰胺39.6高+環(huán)磷酰胺47.8