技術領域
本發(fā)明涉及一種中藥制劑的質量控制方法，具體涉及養(yǎng)榮丸的含量檢測方法。
背景技術：
江蘇七0七天然制藥有限公司生產的養(yǎng)榮丸，溫補氣血，臨床用于用于氣血兩虧，身倦，乏力，食減便溏。養(yǎng)榮丸的標準為部頒標準第五冊（標準號：WS3-B-0985-91），原標準中無檢測成分的要求。為了有效控制生產過程的質量、保證產品的療效，需要研究設計出能準確檢測養(yǎng)榮丸制劑中有效成分的檢測方法。
養(yǎng)榮丸的部頒標準（標準號：WS3-B-0985-91）具體內容如下：
拼音名：YangrongWan
書頁號：Z5-122標準編號：WS3-B-0985-91
【處方】黨參300g黃芪（制）300g熟地黃300g當歸（炒）300g白術300g茯苓300g五味子（制）210g遠志150g白芍300g肉桂210g陳皮210g大棗450g甘草（炙）210g生姜300g
【制法】以上十四味，除生姜、大棗外，其余黨參等十二味粉碎成粗粉，將大棗去核搗爛，與上述粗粉拌勻，干燥后，粉碎成細粉，過篩，混勻，用生姜煎汁泛成丸，干燥，即得。
【性狀】本品為黑褐色小水丸；氣微，味甜、微酸。
【檢查】應符合丸劑項下對水分、重量差異、裝量差異、溶散時限、微生物限度各項的規(guī)定。
【功能與主治】溫補氣血。用于氣血兩虧，神倦，乏力，食減便溏。
【用法與用量】口服，一次9g，一日2次。
【規(guī)格】每14粒重1g
【貯藏】密閉，防潮。
技術實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種分離效果好，檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，可以客觀、全面、準確的評價養(yǎng)榮丸的質量，對控制生產過程的質量、保證產品的療效有重要意義。
本發(fā)明提供的養(yǎng)榮丸的含量檢測控制方法是采用高效液相色譜法進行測定，操作步驟如下：
（1）稱取芍藥苷對照品，配制芍藥苷對照品溶液；
（2）取養(yǎng)榮丸樣品，研細，配制供試品溶液；
（3）將芍藥苷對照品溶液、供試品溶液分別注入高效液相色譜儀中檢測。
上述養(yǎng)榮丸的含量檢測控制方法步驟（1）中用50%甲醇作溶劑配制芍藥苷對照品溶液。
上述養(yǎng)榮丸的含量檢測控制方法步驟（2）中用水作溶劑，超聲提取法配制供試品溶液。
上述養(yǎng)榮丸的含量檢測控制方法步驟（3）所述高效液相色譜條件如下：
色譜柱：C18柱；
檢測波長：230nm；
柱溫：35℃；
流動相：甲醇-乙腈-0.025mol/L磷酸體積比2∶13∶85；
流速：1.0mL/min。
本品每1g含白芍以芍藥苷（C23H28O11）計，不得少于0.8mg。
本發(fā)明經過大量實驗對流動相的組成、流速、色譜柱進行篩選。
1.流動相組成。本發(fā)明根據(jù)芍藥苷的化學性質，對流動相的組成進行了大量篩選，確定采用體積比為2∶13∶85的甲醇-乙腈-0.025mol/L磷酸作為緩沖液，保證芍藥苷和其他組分能有很好的分離效果，使分離度達到要求，且不會出現(xiàn)峰拖尾或前延。
2.流動相流速。本發(fā)明選取了0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min不同流速，實驗結果表明，當流動相流速為1.0mL/min時，芍藥苷的峰形最好、分離度最好。
3.色譜柱柱溫。本發(fā)明考察了色譜柱在30℃、35℃、40℃下化合物的分離效果，實驗結果表明，色譜柱在35℃條件下分離效果最好。
本發(fā)明通過大量實驗，確定了從養(yǎng)榮丸樣品中提取出芍藥苷的溶劑和方法，并篩選出最佳的動相組成、流速、檢測波長、色譜柱等分析條件。本發(fā)明提供的養(yǎng)榮丸的含量檢測控制方法可以靈敏、準確的檢測活性成分，該方法分離效果好，檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好，可以客觀、全面、準確的評價養(yǎng)榮丸的質量，對控制生產過程的質量、保證產品的療效有重要意義。
附圖說明
圖1為芍藥苷紫外掃描曲線圖；
圖2為養(yǎng)榮丸陰性空白高效液相色譜圖；
圖3為系統(tǒng)適用性實驗高效液相色譜檢測圖，其中17min處為芍藥苷峰；
圖4芍藥苷標準品的高效液相色譜檢測圖，其中17min處為芍藥苷峰；
圖5為養(yǎng)榮丸的高效液相色譜檢測圖，其中17min處為芍藥苷峰。
具體實施方式
儀器和材料信息：
BP211D型電子天平（德國賽多利斯股份公司）；日本JASCO高效液相色譜儀，N2000色譜工作站；KQ-250E醫(yī)用超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器廠）。
芍藥苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，0736—200117)；養(yǎng)榮丸由江蘇七O七天然制藥有限公司生產，批號：060201、060202、060203、060204、060301、060302、0600303、060401、060501、060601。
所有試劑均為色譜純或分析純。
實施例1養(yǎng)榮丸含量檢測控制方法的方法學考察
（1）檢測波長的選擇
取芍藥苷對照品溶液（50%甲醇為溶劑）用紫外-可見分光光度計進行檢測，最大吸收波長為230nm。因此選擇在230nm處測定芍藥苷含量最為理想，峰形較好，干擾較少。
（2）色譜條件的選擇
參考有關文獻，決定選用色譜柱：KromasilC18柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.025mol/L磷酸（2∶13∶85），流速1.0ml/min，柱溫30℃時，指標成分保留時間比較恰當。在此條件下芍藥苷的理論塔板數(shù)為13885，分離度為6.5，色譜圖見附圖2。
（3）提取條件的選擇
①取本品（060204）適量，研細，混勻，取粉末0.5g，共2份，分別精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加水25ml，密塞，稱定重量，第一份超聲處理（功率250W，頻率33kHz）60分鐘，第二份用電熱套加熱回流60分鐘，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心（2000轉/分）10分鐘，取上清液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。用上法測得各樣品中芍藥苷含量，結果見表1
表1不同提取方法提取效率比較
由上表可知，兩種提取方法的提取效率相當，超聲處理操作較為簡便，故選擇超聲處理1小時作為提取方法。
②取上述粉末0.5g，共3份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，各精密加入水25ml，密塞，稱定重量。分別超聲處理20分鐘、30分鐘和60分鐘，同法制得供試液并進行測定，結果見表2。
表2不同超聲時間提取效率比較
由上表可知，選用超聲處理30分鐘進行提取，已經能將指標成分充分提出，故選擇超聲處理30分鐘作為提取方法。
③不同提取溶劑的比較
取上述粉末0.5g，共3份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入水、50%甲醇、甲醇25ml，密塞，稱定重量。超聲處理30分鐘，同法制得供試液并進行測定，結果表明：用甲醇提取的供試品溶液峰型較差，拖尾較為嚴重，脂溶性雜質較多；用水和50%甲醇提取的供試品溶液中芍藥苷含量相當，但水提的供試品色譜峰型最好，故選擇水作為養(yǎng)榮丸中芍藥苷成分的提取溶劑。
（3）含量測定方法學
1）色譜條件：KromasilC18柱（4.6×250mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-0.025mol/L磷酸（2∶13∶85）；流速：1.0ml/分鐘；柱溫：30℃；檢測波長：230nm；進樣量：20μl。
2）對照品溶液：精密稱取芍藥苷對照品適量，加50%甲醇制成每1ml含40μg的對照品溶液，即得。
供試品溶液：取本品適量，研細，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水25ml，密塞，精密稱定，超聲處理（功率250W，頻率33KHz）30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用水補足減失的重量，搖勻，離心（2000轉/分）10分鐘，取上清液，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。
陰性對照液：取缺白芍的陰性樣品適量，同法制得陰性對照液，備用。
3）專屬性試驗：在與樣品測定完全相同的條件下，進20μL陰性對照液2次，結果表明，陰性對照液無干擾。
4）線性關系考察：取芍藥苷對照品儲備液（0.20mg/ml）適量，分別用50%甲醇稀釋制成一定濃度的對照品溶液，濃度依次為10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、100μg/ml，精密吸取各對照品溶液20μl分別進樣2次，按擬定的色譜條件測定峰面積（見附圖），記錄各色譜峰面積，以峰面積均值（A）為縱坐標，以進樣量（C）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程A=26334C-1734（r=0.9999），表明芍藥苷在0.2μg～2.0μg范圍內具有良好的線性關系。
5）精密度試驗：分別精密吸取芍藥苷對照品溶液20μl，連續(xù)進樣5次，色譜圖見附圖，結果見表3。
表3芍藥苷精密度
由上表可知，芍藥苷精密度良好。
5）穩(wěn)定性試驗
精密吸取供試品溶液20μl，分別在0、1、2、3、6、12小時進樣，色譜圖見附圖，結果見表4。
表4穩(wěn)定性試驗結果
結果表明，供試液在24小時內穩(wěn)定。
6）重復性試驗
取養(yǎng)榮丸（060204）適量，研細，混勻，取粉末0.5g，共5份，精密稱定，按供試液制備項下之方法制得供試液，并按樣品測定項下之方法測定，色譜圖見附圖，結果見表5。
表5重復性試驗結果
由上表可算得，平均值為1.952mg/g，RSD為1.37%，說明上述定量方法樣品的重現(xiàn)性良好。
7）加樣回收率實驗
取養(yǎng)榮丸（060204）適量，研細，混勻，取粉末0.5g，共5份，精密稱定，分別加入0.5236mg/ml芍藥苷對照品溶液1ml，按供試液制備項下之方法制得供試液，并按樣品測定項下之方法測定，色譜圖見附圖。由下式計算加樣回收率：
表6加樣回收率試驗結果
9）樣品測定
取藥材3批、丸劑10批，分別按藥材和丸劑質量標準正文含量測定方法進行測定，結果見表8。
表8丸劑中芍藥苷含量
由以上實驗結果可知，在上述實驗條件下，儀器的精密度，加樣回收率等均較好，指標成分在12小時內非常穩(wěn)定。
因投料的三批藥材的芍藥苷含量（3.0%）高出藥典標準（1.6%）近一倍，考慮到大生產中的投料時，只要達到藥典標準即可投料，因此暫定養(yǎng)榮丸每1g含白芍以芍藥苷（C23H28O11）計，不得少于0.8mg。